Joker được biết đến là kẻ thù lâu năm và khó chịu nhất của Batman, là đại diện cho "tất cả mọi thứ mà Batman chống lại." Ngoại hình, tính cách, điệu cười cùng những câu nói hay trò đùa của hắn thường để lại ấn tượng sâu sắc cho khán giả và độc giả. Thân phận của hắn rất bí ẩn, tên thật chưa bao giờ được tiết lộ, chỉ biết rằng hắn là một thiên tài tội phạm với tính cách vô cùng quái gở, những kẻ khác còn gọi hắn là "gã hề" (the clown).

Joker rất khó nắm bắt, thường có những kế hoạch chi tiết với độ chính xác cao trong những lần phạm tội. Trong rất nhiều trường hợp Batman không thể đoán được bước đi tiếp theo của Joker là gì và bị rơi vào bẫy của hắn. Joker có một mối quan hệ đặc biệt với Harley Quinn, hai người họ thường hành động cùng nhau tạo nên một trong những cặp đôi tai tiếng bậc nhất trong thế giới truyện tranh.

Joker không sở hữu năng lực đặc biệt nào nhưng bù lại hắn vô cùng nhanh nhẹn, có võ công cao cường, có kỹ năng chiến đấu cũng như kỹ năng sử dụng vũ khí thành thạo. Joker có khả năng chế tạo ra những loại chất độc hóa học, chất nổ, và nhiều loại vũ khí tự chế nguy hiểm khác. Nhưng thứ đáng sợ nhất chính là bộ não thiên tài nhưng điên rồ của hắn và không tuân theo bất kỳ một quy luật thông thường nào.

Lex Luthor cũng là một trong hững kẻ thù không đội trời chung với Superman. Hắn là một kẻ ác nhân siêu giàu, không hề kém cạnh với Batman. Lần đầu Lex Luthor ra mắt khán giả là trong bộ phim Batman v Superman: Dawn of Justice. Lúc này, Batman cho rằng Superman là mầm mống hiểm họa cho Trái đất và không đồng tình với cách làm của người hùng này. Lex Luthor khi ấy đã biết được danh tính thật sự của cả hai. Hắn lập ra một kế hoạch nhằm công kích Batman lẫn Superman, khiến cuộc chiến giữa 2 người diễn ra.

Lex Luthor, dù không có siêu năng lực siêu nhiên gì, song hắn là một kẻ mưu mô thâm hiểm và tính toán vô cùng. Lex bắt cóc mẹ và bạn gái của Superman, tạo ra quái vật Doomsday, nguyên nhân gây ra cái chết cho vị siêu anh hùng. Cho tới khi bộ phim Batman v Superman: Dawn of Justice kết thúc, người xem vẫn tự hỏi liệu Lex Luthor vẫn còn kế hoạch gì làm cản trở nhóm các anh hùng hay không.

Bane sinh ra ở Santa Prisca (một đất nước giả tưởng vùng Caribe của DC Comics). Cha của hắn là người lãnh đạo một cuộc cách mạng ở đất nước này nhưng bất thành và phải sống ngoài vòng pháp luật. Chính quyền thối nát ở đất nước này quyết định kết án Bane khổ sai chung thân thay cho cha hắn. Do đó, quãng đời tuổi thơ và thanh niên của Bane sống toàn bộ trong môi trường ngục tù.

Trong thời gian ở nhà tù, Bane thường mang trên vai một chú gấu bông mà hắn gọi là Osito (có nghĩa là "Gấu Nhỏ" trong Tiếng Tây Ban Nha), hắn coi đây là người bạn duy nhất của mình. Chú gấu này có một cái lỗ ở lưng có chứa một con dao găm mà Bane sử dụng để tự vệ trong nhà tù. Ở trong một môi trường hà khắc, bản năng tự nhiên của Bane trỗi dậy. Hắn học cách chiến đấu, sự dẻo dai và nhanh nhẹn. Bane giết người lần đầu vào năm hắn lên tám, đâm chết một tên tội phạm muốn lợi dụng hắn để lấy thông tin trong nhà ngục. Với sự lỳ lợm và tàn nhẫn cùng kỹ năng chiến đấu tay đôi hoàn hảo, Bane nhanh chóng trở thành đại ca của nhà tù và hắn tự xưng là Bane từ đó.

Khi lớn lên, chính phủ quyết định sử dụng Bane là vật mẫu thí nghiệm cho một loại chất bí mật có tên là Venom. Bane may mắn là kẻ duy nhất sống sót và phát hiện ra loại chất bí mật đó khiến hắn có một sức mạnh khủng khiếp. Tuy nhiên Bane phải uống nó mỗi 12 tiếng để suy trì sức mạnh này, nếu không sẽ bị tác dụng phụ làm suy nhược cơ thể. Sau đó Bane đào tẩu khỏi nhà tù và trở thành một tay giết thuê chuyên nghiệp.

Tướng Zod là kẻ thù của Superman, lần đầu tiên xuất hiện trong Man of Steel năm 2013. Hắn là người đến từ hành tinh Krypton, cùng với Superman. Trong phim, hành tinh Krypton đang đứng trước bờ vực của sự diệt vong. Do bất đồng ý kiến với ban lãnh đạo, hắn đã lên kế hoạch cho một cuộc đảo chính. Thế nhưng những toan tính của tướng Zod đã thất bại, khiến hắn bị lưu đày.

Trong khi đó, cha ruột của Superman lường trước được số phận của hành tinh Krypton nên đã ăn cắp Cổ Bản – vật lưu trữ thông tin về các thế hệ tương lai của người Krypton. Ông đã gửi Cổ Bản cùng với con trai của mình là Kal-El (sau này là Clark Kent/Superman) tới Trái đất. Sau này khi Kal-El lớn lên, cậu nhận ra được sự khác biệt của mình và tìm được chiếc phi thuyền đã đưa cậu tới đây. Không may, Kal-El vô tình để lô vị trí của mình cho tướng Zod. Tướng Zod, sau khi thoát khỏi hình phạt do hành tinh của hắn bị phá hủy, đã lập tức tới Trái đất. Hắn mang theo tham vọng xâm chiếm nơi này và biến nó thành một hành tn Krypton thứ 2, nhưng Superman đã ngăn chặn điều đó và tiêu diệt hắn.

Sau cái chết của Superman, Batman và Wonder Woman đã đứng lên để đi tìm những người hùng khác, tạo ra nhóm Liên Minh Công Lý. Steppenwolf chính là nguyên nhân để cả nhóm hợp nhất sức mạnh. Hắn tới từ một hành tinh khác, với một sức mạnh kinh hoàng, thậm chí chính Wonder Woman – người mang quyền năng của một Á thần cũng phải chật vật khi giao đấu với hắn.

Steppenwolf nhen nhóm ý định xâm chiếm các hộp Mother Box – những chiếc hộp uy lực mang trong mình khả năng vô tận. Hắn cùng các tay sai của mình là đoàn quân Parademons mang sự hủy diệt tới người Amazon, người Atlantis và nhân loại để đạt được mục đích. Thế nhưng thực chất, Steppenwolf chưa phải là kẻ ác nhân mạnh nhất trong vũ trụ DC. Hắn chỉ là tay sai của Darkseid, một kẻ mạnh thực sự sẽ khiến cho cả nhóm Liên Minh Công Lý phải chao đảo. Có nhiều dự đoán cho rằng, sau Steppenwolf, Darkseid sẽ xuất hiện trong DCEU và sẽ khiến cho Justice League khó nhọc thật sự trong trận chiến.

Là kẻ phản diện trong phim của Wonder Woman, Ares là một vị thần của chiến tranh. Tương truyền rằng từ xa xưa, Ares đã lên kế hoạch đảo chính lại Zeus. Hắn mang tới trận chiến, sự đau thương và phá hủy. Hắn tiêu diệt các vị thần và nhân loại. Chính vì vậy, Thần Zeus đã ban tặng cho người Amazon vũ khí và sức mạnh, phòng trường hợp khi Ares quay trở lại. Tất cả những câu chuyện về Ares, Wonder Woman đều được nghe qua lời kể, cho tới khi cô thực sự gặp hắn.

Trận chiến giữa Ares và Wonder Woman trên màn ảnh là một trận chiến hoành tráng và kịch tính. Chính cuộc chiến này với Ares mà Wonder Woman đã nhận ra sự thật đau đớn về loài người. Cô nghĩ rằng chỉ cần tiêu diệt được kẻ thù này, loài người sẽ không còn chiến tranh nữa nhưng cô đã nhầm.

June Moon là một nữ họa sĩ bình thường cho đến khi cô đến chơi cùng bạn tại lâu đài Terror Castle. Tại đây, cô bắt gặp một căn phòng bí mật, một thực thể tự xưng là Dzamor đã trao cho cô sức mạnh Enchantress. Bằng cách mở miệng nói “Enchantress”, June Moon sẽ sở hữu sức mạnh ma pháp cực kỳ kinh khủng của Enchantress.

Với sức mạnh này, cô ban đầu sử dụng nó để đánh bại nhiều tên tội phạm. Nhưng đằng sau sức mạnh này lại là một bí ẩn đáng sợ. Sức mạnh Enchantress khiến June Moon hình thành tính cách tà ác, nham hiểm. Đó chính là tính cách cùa phù thủy Enchantress kẻ thực sự sở hữu sức mạnh này. Tính cách của nguyên thần Enchantress ăn sâu vào tiềm thức của June Moon, khiến June trở thành người tâm thần phân liệt, lúc chánh lúc tà, lúc hiền dịu như gió thoảng lúc cay độc như bão tố. Chính vì thế thi thoảng ta thấy Enchantress xuất hiện trong danh sách siêu anh hùng và đôi khi trong nhóm tội phạm khét tiếng.

Enchantress nếu xét về sức mạnh không hề thua kém bất kỳ siêu anh hùng hay ác nhân nào. Trong Suicide Squad, các fan của DC đã được thấy một phần sức mạnh của Enchantress bao gồm: di chuyển tức thời, điều khiển nguyên tố, tâm linh, tạo ra cả một đội quân…

Ra’s al Ghul hay được biết đến với cái tên Demon’s Head điều hành League of Assassin – một nhóm chuyên dụng được thành lập nhằm khôi phục lại sự cân bằng của thế giới bằng cách giết hại nhiều mạng người.

Nhân vật này lần đầu xuất hiện trong bộ truyện tranh của DC Comics số 232 năm 1971. Hắn không chỉ là một bác sĩ thiên tài và bậc thầy kiếm sĩ, mà còn có khả năng sống qua hàng trăm năm nhờ một thứ thuốc bất tử Lazarus Pits, khiến hắn trở thành một mối đe dọa lớn với loài người và cả Batman.

Mối quan hệ giữa Ra’s al Ghul và Batman khá kì lạ khi hắn tôn trọng Batman và đã nhiều lần muốn gán ghép Batman với con gái mình để anh trở thành người thừa kế cho ngôi vị Demon’s Head.

Ban đầu Harvey Dent là một Công tố viên tài giỏi và trợ thủ đắc lực cho Batman trong việc đưa tội phạm ở Gotham ra ánh sáng. Nhưng trong một lần bị Joker lừa bẫy, Harvey Dent bị nhốt trong một căn phòng đầy bom. Tai nạn này đã khiến cho Harvey Dent trở nên căm ghét Batman và những cảnh sát khác của Gotham.

Một nửa khuôn mặt của hắn đã biến dạng vì axit, khiến Harvey Dent trở thành một kẻ chủ mưu tàn bạo với biệt danh Two Face. Hắn bị ám ảnh với tính hai mặt, và thường quyết định cuộc sống lẫn cái chết của Batman cũng như những người vô tội bằng cách tung đồng xu.

Hắn từng là đồng minh của Ủy viên Gordon và Batman, nhưng hắn sống bên lề mặt trái của pháp luật, đại diện cho những công dân lương thiện nhất và tàn bạo nhất của Gotham.

Doomsday trong nguyên gốc truyện tranh của DC Comics rất khác so với Doomsday phiên bản điện ảnh mà chúng ta thấy trong Batman vs Superman. Nó không phải được tạo ra từ xác của General Zod trong buồng tái sinh của tàu Krypton. Nguồn gốc của Doomsday còn phức tạp hơn thế rất nhiều.

Trong Comics, DOOMSDAY (hay tên nguyên bản là The Ultimate Lifeform) là sản phẩm của một nhà khoa học người ngoài hành tinh. Vào khoảng 250.000 năm trước, hắn chọn hành tinh khắc nghiệt tên Krypton để nuôi dưỡng đứa trẻ The Ultimate Lifeform. Nhà khoa học quái đản quyết định đào tạo đứa trẻ này thành "vũ khí sống" bằng cách tạo ra một bầy đàn quái vật để săn đuổi nó và giết nó hết lần này đến lần khác. May mắn và cũng tai họa thay khi The Ultimate Lifeform lại có khả năng tái sinh. Ghi dấu những cái chết, đứa trẻ tuân thủ quá trình huấn luyện khắc nghiệt, đến lớn nó báo thù bằng cách giết sạch bọn quái vật lâu la và nhà khoa học rồi trốn sang các hành tinh khác nhằm tiêu diệt sự sống. Xuống Trái Đất hắn đụng độ hội Justice League và được đặt cho cái tên là DOOMSDAY với ý nghĩa là "Ngày tàn của Trái Đất".

Sức mạnh của Doomsday là vô cùng khủng khiếp và không có giới hạn cụ thể và nó gần như bất tử. Nhờ cơ thể thích nghi mà Doomsday đã có khả năng: kháng tâm linh, kháng Kryptonite, thổi lửa, tạo lá chắn năng lượng và bắn xương để tấn công. Doomsday đã từng đánh bại cả Darkseid, Superman, hàng trăm Green Latern và một cơ số những thực thể vũ trụ hùng mạnh khác cũng đã từng bị nó đánh bại. Trong truyện tranh, các thực thể hùng mạnh này chỉ có thể liên kết lại để đuổi Doomsday đến một nơi khác hoặc nhốt nó lại chứ chưa từng giết được nó.

Scarecrow, tên thật là Jonathan Crane, là một nhân vật siêu ác nhân – kẻ thù của Batman trong truyện tranh của DC Comics.

Jonathan sinh ra là một đứa con rơi. Cha hắn bỏ đi trước khi hắn được sinh ra, còn mẹ hắn chẳng hề quan tâm đến hắn, bỏ Jonathan sang nhà bà ngoại. Đó cũng là chuỗi ngày tháng khủng khiếp nhất trong cuộc đời Jonathan vì bà ngoại hắn là một kẻ cuồng đạo cực đoan, luôn hành hạ và nhốt hắn trong 1 căn phòng tối. Còn bạn bè xung quanh luôn xúm vào bắt nạt, lấy Jonathan ra làm trò tiêu khiển. Chính tuổi thơ tràn ngập trong nỗi sợ từ ở nhà đến ra đường khiến Jonathan luôn bị ám ảnh bởi nỗi sợ hãi.

Bước vào cấp ba, Jonathan vẫn bị ức hiếp dã man nên hắn đã lên kế hoạch trả thù những kẻ bắt nạt mình trong bộ đồ hóa trang bù nhìn, nhưng hắn vô tình giết chết họ và phát hiện ra bí mật “nỗi sợ hãi có thể giết người”. Điều này đã thôi thúc hắn trở thành một giáo sư hàng đầu tại Khoa tâm thần ở Gotham University, chuyên ngành Ám ảnh sợ hãi. Hắn cũng thực hiện những cuộc thí nghiệm về sự sỡ hãi lên các bệnh nhân của hắn tại Arkham Asylum. Dần dần, những thí nghiệm này bắt đầu đi quá xa và khiến đầu óc hắn trở nên điên loạn

Bizarro là kết quả từ thí nghiệm của Lex Luthor ở hành tinh hình vuông Bizarro (một hành tinh ngược lại với Trái Đất) khi cố gắng kết hợp Superman và DNA của con người. Phiên bản ngược này yếu hơn nhiều nếu đem so sánh với Superman. Trong khi Superman nhanh nhẹn khéo léo thì Bizarro lại cực kì vụng về, Superman có mắt bắn ra lửa và miệng thở ra băng thì ngược lại Bizarro lại bắn ra băng ở mắt và miệng thì thở ra lửa.

Vốn định mệnh sinh ra để làm người hùng nhưng Bizarro lại được xem như một phiên bản “lỗi” của Superman trên nhiều phương diện. Ví dụ như Superman thông mình thì Bizarro lại hoàn toàn ngốc nghếch. Những điều này khiến Bizarro “bị ghét”. Đau đớn, buồn bã và mất phương hướng, Bizarro dần dần bước chân vào con đường làm kẻ xấu giống như Joker hay Lex Luthor.